尊龙凯时推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，该产品具备多项显著特点，帮助科研人员更高效地进行分子检测。

产品特点

本试剂盒的特点包括：

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 经过优化的引物和其他组分，具有高灵敏度。
3. 提供阳性对照，方便区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性和定量检测，定量检测时线性范围可达5个数量级。
6. 本产品足以支持50次20μL体系下的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本试剂盒仅限于科研使用。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区)

使用自选的方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区)

为避免污染，请在独立区域进行以下稀释操作：

1. 标记6个离心管，分别标记为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
4. 在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
5. 重复以上操作，直到获得6个稀释度的标准曲线样品，放冰待用。如不制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区)

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管，向每个PCR管中加入相应成分（详见说明书）。

四、添加模板（模板添加区)

在qPCR管中分别加入2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区)

将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，按照步骤进行扩增反应（详见说明书）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线，再根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度。
2. 若无标准曲线，依据如下标准判定结果：阳性对照Ct值<30，明显指数增长，呈典型S型曲线；阴性对照Ct值38或无Ct值，无明显指数增长和平台期；样本检测结果Ct值<35，显著指数增长，表示检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，则表示未检测到婴儿利什曼虫，结果为阴性；Ct值在35-38范围需复检，若仍在该范围内且有指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

产品应低温运输，建议保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

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